Валидация иммуноферментной тест‐системы на основе рекомбинантного антигена d34 для мониторинга протективного гуморального ответа к вирусу денге при иммунизации мышей вакцинным препаратом MVA‐d34

Цель исследования — валидация иммуноферментной тест‐системы для полуколичественного определения специфических IgG‐антител к домену III E‐белка вируса денге (ДЕНВ) серотипов 1‐4 в сыворотке крови мышей.
Коммерческие наборы реагентов АО БТК «Биосервис» (Москва, Россия). Рекомбинантный белок d34, экспрессированный в бакуловирусной системе. Сыворотки мышей линии BALB/c (n=100, 11 групп). Вируснейтрализующие антитела к серотипам D1–D4 ДЕНВ определяли методом реакции нейтрализации (РН) в культуре клеток Vero.
Специфичность и чувствительность разработанной тест‐системы составили 100 % (95 % ДИ: 91,2–100,0 %), критический уровень ОП составил 0,16, CV не превышал 8,2 %. Исследование стабильности при 37 °С (14 сут) выявило снижение сигнала на 4,7 % (95 % ДИ: от –11,3 % до +1,9 %), что позволяет прогнозировать сохранение функциональных свойств иммуносорбента в течение 12 месяцев при хранении при 2–8 °С. Закономерное превышение значений ИФА над титрами РН отражает различие в детектируемых пулах антител и подтверждает целесообразность совместного применения обоих методов для комплексной оценки гуморального ответа.
ИФА тест‐система обладает высокими диагностическими характеристиками и пригодна для полуколичественного определения специфических IgG‐антител к домену III E‐белка ДЕНВ в сыворотке лабораторных мышей. Ее применение обеспечивает надежный инструмент для доклинического мониторинга иммуногенности вакцинных кандидатов и создает методологическую основу для стандартизации контроля качества биопрепаратов на основе серотип‐ специфичных эпитопов.

1. Anumanthan G., Sahay B., Mergia A. Current Dengue Virus Vaccine Developments and Future Directions // Viruses. 2025. V. 17. N 2. P. 212. https://doi.org/10.3390/v17020212

2. Limothai U., Tachaboon S., Dinhuzen J., Hunsawong T., Ong‐Ajchaowlerd P., Thaisomboonsuk B., Fernandez S., Trongkamolchai S., Wanpaisitkul M., Chulapornsiri C. et al. Dengue pre‐vaccination screening test evaluation for the use of dengue vaccine in an endemic area // PLoS ONE. 2021. V. 16. N 9. e0257182. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0257182

3. Halstead S.B. Neutralization and antibody‐dependent enhancement of dengue viruses // Current Topics in Microbiology and Immunology / Ed. by U. Koszinowski, H. Wagner. Berlin: Springer. 2003. V. 267. С. 251–266. https://doi.org/10.1007/978‐3‐662‐06094‐2_13

4. Katzelnick L.C., Gresh L., Halloran M.E. et al. Antibodydependent enhancement of severe dengue disease in humans // Science. 2017. V. 358. N 6365. P. 929–932. https://doi.org/10.1126/science.aan6836

5. Katzelnick L.C., Fonville J.M., Sang X. et al. Dengue viruses cluster antigenically but not as discrete serotypes // Science. 2015. V. 349. N 6254. P. 1338–1343. https://doi.org/10.1126/science.aaa4204

6. Wahala W.M.P.B., Silva A.M. Natural strain variation and antibody neutralization of dengue serotype 3 viruses // PLoS Pathogens. 2010. V. 6. N 3. e1000821. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1000821

7. Mintaev R.R., Glazkova D.V., Orlova O.V., Ignatyev G.M., Oksanich A.S., Shipulin G.A., Bogoslovskaya E.V. Development of MVA‐d34 tetravalent dengue vaccine: design and immunogenicity // Vaccines. 2023. V. 11. N 4. P. 831. https://doi.org/10.3390/vaccines11040831

8. ГОСТ 33215‐2014. Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур. М.: Стандартинформ, 2014.

9. ГОСТ 33216‐2014. Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами. М.: Стандартинформ, 2014.

10. Игнатьев Г.М., Оксанич А.С., Казакова Е.В., Самарцева Т.Г., Отрашевская Е.В., Уйба С.В., Трухин В.П. Изоляция и генетический анализ вируса Чикунгунья из комаров Aedes aegypti и Aedes albopictus, отловленных в Центральной Америке // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2023. Т. 100. N 5. С. 310–318. https://doi.org/10.36233/0372‐9311‐354

11. Игнатьев Г.М., Каа К.В., Оксанич А.С. и др. Индикация и идентификация вирусов денге и Чикунгунья в комарах рода Aedes spp., отловленных в центральной Америке // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2020. Т. 97. N 3. С. 227–232. https://doi.org/10.36233/0372‐9311‐2020‐97‐3‐4

12. Государственная фармакопея Российской Федерации / МЗ РФ. XIII изд. Т. 1. Москва, 2015. 1470 с.

13. Беланова А.И., Ковалева Е.Л., Митькина Л.И. Сравнение подходов к изучению стабильности лекарственных средств в рамках национальной процедуры в России и Евразийском экономическом союзе // Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2021. Т. 11. N 1. С. 16–23. https://doi.org/10.30895/1991‐2919‐2021‐11‐1‐16‐23

14. Russell P.K., Nisalak A., Sukhavachana P., Vivona S. A. Plaque reduction test for dengue virus neutralizing antibodies // J. Immunol. 1967. V. 99. N 2. P. 285–290.

15. Morens D.M., Halstead S.B., Larsen L.K. Comparison of dengue virus plaque reduction neutralization by macro and "semi‐micro" methods in LLC‐MK2 cells // Microbiol. Immunol. 1985. V. 29. N 12. P. 1197–1205. https://doi.org/10.1111/j.1348‐0421.1985.tb00909.x

16. Baryshnikova V., Turchenko Y., Tuchynskaya K., Belyaletdinova I., Butenko A., Dereventsova A., Ignatiev G., Kholodilov I., Larichev V., Lyapeykova E., Rogova A., Shakaryan A., Shishova A., Gmyl A., Karganova G. Recombinant TBEV Protein E of the Siberian Subtype Is a Candidate Antigen in the ELISA Test System for Differential Diagnosis // Diagnostics. 2023. V. 13. N 20. P. 3277. https://doi.org/10.3390/diagnostics13203277

17. Нетесова И.Г., Бобкова М.Р. Внутрилабораторный контроль качества неколичественных методов ИФА // Справочник заведующего КДЛ. 2017. N 8. С. 65–74.

18. Dejnirattisai W., Jumnainsong A., Onsirisakul N. et al. A new class of highly potent, broadly neutralizing antibodies isolated from viremic patients infected with dengue virus // Nature Immunology. 2015. V. 16. N 2. P. 170–177. https://doi.org/10.1038/ni.3058

19. Tennakoon M.S.B.W.T.M.N.S., Lee K.‐H., Lee H.‐M., Park J.‐ Y., Shin H.‐J. Optimization of Conditions for Expression of Dengue Serotype 2 EDIII Protein in Escherichia coli and Immune Responses of Adjuvant‐Free EDIII Ferritin Nanoparticles Against Dengue Virus in BALB/c Mice // Viruses. 2025. V. 17. N 1. P. 129. https://doi.org/10.3390/v17010129