Оценка методов очистки коринебактериозного аллергена  с определением концентраций и его экспериментальное  применение

Цель. Поиск результативного метода получения бактериального белка и определения оптимальной концентрации для выявления типоспецифичности. 

Материал и методы. На примере референта штамма С. xerosis N 1911, выращенного на усовершенствованной нами питательной среде, изучены методы  осаждения белка хлористым натрием, сернокислым аммонием , гексаметафосфатом  натрия,  трихлоруксусной  кислотой  и  полиэтиленгликолем.  Пороговую  чувствительность аллергена в 6 разведениях определяли на 24 морских свинках,  зараженных  коринебактериями.  Биологическую  активность  изучали  на  зараженных культурами М. БЦЖ – M. avium, C. xerosis N 1911, C. ulcerans N 675, C.  bovis, морских свинках в количестве 36 голов и на 3 кроликах , зараженных  Corynebacterium xerosis. 

Результаты. Проведено сравнительное испытание 5 методов осаждения белка.  При использовании в качестве осадителя сернокислого аммония сравнительно  высокие результаты удалось получить при концентрации соли 30% и pH не ниже  5,8.  Более  значительное  осаждение  белка  происходило  в  изоэлектрической  точке NaCl при pH 3,9. Отмечены незначительные осаждающие свойства трихлоруксусной кислоты, отсутствие таковых у полиэтиленгликоля и выпадения  незначительного  осадка  гексаметафосфатом  натрия.  Установлена  пороговая  чувствительность (0,00005 мг в 0,1 мл) и единица действия аллергена (0,0003  мг). Выявлено наличие интенсивности кожной реакции на гомологичный заражению сенситин.   

Заключение. Полученные данные выявляют оптимальный способ осаждения  белка, единицу действия коринебактерионого аллергена и расширяют пред ставления  о  механизмах  возникновения  сенсибилизации  макроорганизма  к  туберкулину. 

1. Безгин В.М., Козлов В.Е. Новые технологии производства диагностических препаратов для ветеринарной медицины // Ветеринарная медицина: М1жвщомчий тематичний науковий зб1рник. XapKiB. 2003. N 81. С. 4145.

2. Лискова Е.А., Слинина К.Н. Выделение микобактерий, нокардиоформных актиномицетов и коринебактерий из патологического материала // Сб. статей VII Международной научно‐практической конференции «Научное обеспечение интенсивного развития животноводства и кормопроизводства», Тверь, 22‐24 марта, 2016. С. 87‐89.

3. Кресс В.М. Туберкулез в Российской Федерации – проблема государственной значимости // Вестник РАМН. 2000. N 12. С. 19‐20.

4. Лискова Е.А., Слинина К.Н., Блохин А.А. Выделение коринебактерий из объектов животноводческих помещений // Путь науки. 2015. N 12. С. 31‐32.

5. Fortune S.M., Solache A., Jaeger A., Hill P.J., Belisle J.T., Bloom B.R., Rubin E.J., Ernst J.D. Mycobacterium tuberculosis Inhibits Macrophage Responses to IFN‐γ through Myeloid Differentiation Factor 88‐Dependent and ‐Independent Mechanisms // J. Immunol. 2004. V. 172. N 10. P. 62726280. Doi: 10.4049/jimmunol.172.10.6272

6. Баратов М.О., Ахмедов М.М., Сакидибиров О.П. К выяснению причин неспецифических реакций на туберкулин // Ветеринарный врач. 2014. N 2. С. 24‐27.

7. Нуратинов P.A., Ургуев К. Р., Баратов М.О. Кислотоустойчивые микроорганизмы ‐ микобактерии, нокардии, родококки: химический состав, биологические свойства, антигенная структура // Проблемы туберкулеза. 2001. Т. 78. N 5. С. 54‐57.

8. Amadori M., Lyaschenko K.P., Gennaro M.L., Pollock J.M., Zerbini I. Use of recombinant proteins in antibody tests for bovine tuberculosis // Vet. Microbiol., 2002. V. 85. Iss. 4. P. 379‐389. Doi: 10.1016/s0378‐1135(02)00005‐6

9. Campos‐Neto A., Rodrigues‐Junior V., Pedral‐Sampaio D.B., Netto E.M., Ovendale P.J., Coler R.N., Skeiky Y.A., Badaró R., Reed S.G. Evaluation of DPPD, a single recombinant Mycobacterium tuberculosis protein as an alternative antigen for the Mantoux test // Tuberculosis (Edinb). 2001. V. 81. Iss. 5‐6. P. 353‐358. Doi: 10.1054/tube.2001.0311

10. Иванов М.М., Шаров А.Н., Беляев A.C. и др. Стандартизация сухого очищенного туберкулина // Труды ВГНКИ. 1972. Т. 18. С. 20‐28.

11. Досон, Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика. М.: Мир, 1991. 543 с.

12. Меджидов М.М., Меджидова Ш.М., Омарова С.М. Микротест‐системы в лабораторной диагностике инфекционных болезней. М.: Медицина, 2006. 67 с.

13. Козлов В.Е., Букова Н.К., Найманов А.Х. Оценка активности и специфичности коммерческих серий туберкулина (ППД) для млекопитающих отечественного и зарубежного производства // Ветеринарная патология. 2004. N 1‐2(9). С. 82‐85.