ecodagЮг России: экология, развитиеSouth of Russia: ecology, development1992-10982413-0958State Institute of Applied Ecology of the Republic of Dagestan10.18470/1992-1098-2026-2-7ecodag-3713Research ArticleВИРУСОЛОГИЯVIROLOGYВыделение вируса африканской чумы свиней в первичной культуре клеток тестикул свиньиIsolation of the African swine fever virus in primary cultures of pig testicular cellshttps://orcid.org/0009-0003-4465-0179МоисеенкоД. С.MoiseenkoD. S.

Данила С. Моисеенко, аспирант, ветеринарный врач референтной лаборатории по африканской чуме свиней

600901 г. Владимир, ул. Гвардейская, 6

Тел. +79191963812

Danila S. Moiseenko, Postgraduate student, veterinarian, ASF Reference Laboratory

6 Gvardeyskaya St, Vladimir, 600901

Tel. +79191963812

oiseenko_ds@ARRIAH.RUhttps://orcid.org/0000-0003-3604-7161ЧернышевР. С.ChernyshevR. S.

Роман С. Чернышев

600901 г. Владимир, ул. Гвардейская, 6

Roman S. Chernyshev

6 Gvardeyskaya St, Vladimir, 600901

https://orcid.org/0000-0003-1584-3169ПузанковаО. С.PuzankovaO. S.

Ольга С. Пузанкова

600901 г. Владимир, ул. Гвардейская, 6

Olga S. Puzankova

6 Gvardeyskaya St, Vladimir, 600901

https://orcid.org/0000-0001-5843-2779ГавриловаВ. Л.GavrilovaV. L.

Вера Л. Гаврилова

600901 г. Владимир, ул. Гвардейская, 6

Vera L. Gavrilova

6 Gvardeyskaya St, Vladimir, 600901

https://orcid.org/0000-0002-5438-8026ИголкинА. С.IgolkinA. S.

Алексей С. Иголкин

600901 г. Владимир, ул. Гвардейская, 6

Alexey S. Igolkin

6 Gvardeyskaya St, Vladimir, 600901

Федеральный центр охраны здоровья животныхРоссияFederal Centre for Animal Health ProtectionRussian Federation20260308202621281‐89Copyright © Моисеенко Д.С., Чернышев Р.С., Пузанкова О.С., Гаврилова В.Л., Иголкин А.С., 20262026Моисеенко Д.С., Чернышев Р.С., Пузанкова О.С., Гаврилова В.Л., Иголкин А.С.Moiseenko D.S., Chernyshev R.S., Puzankova O.S., Gavrilova V.L., Igolkin A.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://ecodag.elpub.ru/ugro/article/view/3713

Разработка и валидация альтернативного метода выделения вируса АЧС из биологического материала от домашних свиней и диких кабанов в первичной культуре клеток тестикул свиньи. Культуру клеток тестикул свиньи можно использовать для вирусовыделении в случае невозможности приобретения доноров, несмотря на меньшую аналитическую чувствительность (от 4.33±0.33 до 5.76±0.13 lg ГАдЕ50/см3) при сравнении со спленоцитами свиньи (от 5.0±0.12 до 6.0±0.14 lg ГАдЕ50/см3). Разработанный метод обладает 100 % специфичностью, 90.91 % диагностической чувствительностью при выделении вируса АЧС как из биологического материала от домашних свиней, так и от диких кабанов.Проведенные исследования позволили расширить арсенал методов вирусологической диагностики АЧС. Оценка альтернативной культуры клеток, подходящей для выделения, позволила установить оптимальную посевную концентрацию клеток, при которой максимальный титр вируса АЧС может достигать 6.33±0.06 lg ГАдЕ50/см3. Валидированный метод выделения вируса АЧС позволяет применять его в ветеринарных лабораториях при невозможности использования доноров.

Development and validation of an alternative method for isolating ASFV from biological materials from domestic pigs and wild boar in primary cultures using pig testes.Pig testis cell culture can be used to isolate viruses if donors are not available, despite lower sensitivity (4.33±0.33–5.76±0.13 lg GAdE50/cm3) compared to pig spleen cells (5.0 ± 0.12–6.0±0.14 lg GAdE50/cm3). The developed method has 100 % specificity and 90.91 % diagnostic sensitivity when isolating the ASFV from both biological material from domestic pigs and wild boars.The studies conducted have made it possible to expand the arsenal of methods for virological diagnosis of ASF. Evaluation of an alternative cell culture suitable for isolation allowed us to establish the optimal inoculation concentration of cells, at which the high titer of the ASFV can reach 6.33±0.06 lg GAdE50/cm3. The validated method of ASFV isolation allows it to be used in veterinary laboratories when donors cannot be used.

АЧСвирусологический методкультура клетоктестикулы свиньиASFVvirus isolationcell cultureswine testicular (STReferencesGalindo I., Alonso C. African swine fever virus: A review // Viruses 2017. V. 9. 103 p.Galindo I., Alonso C. African swine fever virus: A review. Viruses. 2017, vol. 9, 103 p.African Swine Fever (ASF) Situation Report 74. URL: https://www.woah.org/app/uploads/2026/03/asf‐report‐74.pdf (дата обращения: 16.02.2026)African Swine Fever (ASF) Situation Report 74. Available at: https://www.woah.org/app/uploads/2026/03/asf‐report‐74.pdf (accessed: 16.02.2026)Costard S., Mur L., Lubroth J., Sanchez‐Vizcaino J. M., Pfeiffer D. U. Epidemiology of African swine fever virus // Virus Res. 2013. V. 173. N 1. P. 191–197. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2012.10.030Costard S., Mur L., Lubroth J., Sanchez‐Vizcaino J. M., Pfeiffer D. U. Epidemiology of African swine fever virus. Virus Res., 2013, vol. 173, no. 1, pp. 191–197. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2012.10.030Dixon L.K., Sun H., Roberts H. African swine fever // Antivir Res. 2019. V. 165. P. 34–41. https://doi.org/10.1016/j.antiviral.2019.02.018Dixon L.K., Sun H., Roberts H. African swine fever. Antivir Res., 2019, vol. 165, pp. 34–41. https://doi.org/10.1016/j.antiviral.2019.02.018Eustace MR. On a form of swine fever occurring in British East Africa (Kenya Colony) // J. Comp Pathol Ther. 1921. V. 34. P. 159–191. https://doi.org/10.1016/S0368‐1742(21)80031‐4Eustace M.R. On a form of swine fever occurring in British East Africa (Kenya Colony). J. Comp Pathol Ther., 1921, vol. 34, pp. 159–191. https://doi.org/10.1016/S0368‐1742(21)80031‐4Beltrán‐Alcrudo D., Lubroth J., Depner K., Rocque S. African swine fever in the Caucasus // EMPRES Watch. 2008. V. 1. P. 1–8. https://doi.org/10.13140/RG.2.1.3579.1200Beltrán‐Alcrudo D., Lubroth J., Depner K., Rocque S. African swine fever in the Caucasus. EMPRES Watch, 2008, vol. 1, pp. 1–8. https://doi.org/10.13140/RG.2.1.3579.1200Шотин А.Р., Иголкин А.С., Мазлум А., Шевченко И.В., Бардина Н.С., Морозова Е.О., Шевцов А.А. Африканская чума свиней в Приморском крае: эпизоотическая ситуация и молекулярно‐биологические свойства изолята, выделенного из трубчатой кости от дикого кабана // Ветеринария сегодня. 2022. T. 11. N 4. C. 347–358. https://doi.org/10.29326/2304‐196X‐2022‐11‐4‐347‐358Shotin А.R., Igolkin A.S., Mazloum A., Shevchenko I.V., Bardina N.S., Morozova E.O., Shevtsov А.А. African swine fever in the Primorsky Krai: disease situation and molecular and biological properties of the isolate recovered from a wild boar long bone. Veterinary Science Today, 2022, vol. 11, no. 4, pp. 347–358. (In Russian) https://doi.org/10.29326/2304‐196X‐2022‐11‐4‐347‐358Netherton C.L., Goatley L.C., Reis A.L., Portugal R., Nash R.H., Morgan S.B., Gault L.,Nieto R., Norlin V., Gallardo C., Ho C.S., Sánchez‐Cordón P.J., Taylor G., Dixon L.K. Identification and immunogenicity of african swine fever virus antigens // Front. Immunol. 2019. V.10. Article number: 1318. https://doi.org/10.3389/fimmu.2019.01318Netherton C.L., Goatley L.C., Reis A.L., Portugal R., Nash R.H., Morgan S.B., Gault L.,Nieto R., Norlin V., Gallardo C., Ho C.S., Sánchez‐Cordón P.J., Taylor G., Dixon L.K. Identification and immunogenicity of african swine fever virus antigens. Front. Immunol., 2019, vol. 10, article number: 1318. https://doi.org/10.3389/fimmu.2019.01318Шарыпова Д.В., Жуков И.Ю., Власова Н.Н., Пузанкова О.С., Гаврилова В.Л., Иголкин А.С., Коропова Н.Н., Жбанова Т.В. Сравнительный анализ репродукционных свойств вируса африканской чумы свиней изолята Одинцово 02/14 в первичных культурах клеток // Ветеринария сегодня. 2017. T. 20. N 1. С. 5–9.Sharypova D.V., Zhukov I.Yu., Vlasova N.N., Puzankova O.S., Gavrilova V.L., Igolkin A.S., Koropova N.N., Zhbanova T.V. Comparative analysis of the reproductive properties of the African swine fever virus isolate Odintsovo 02/14 in primary cell cultures. Veterinariya segodnya [Veterinary Science Today]. 2017, vol. 20, no. 1, pp. 5–9. (In Russian)Takenouchi T., Masujin K., Suzuki S., Haraguchi S., Hiramatsu K., Kokuho T., Uenishi H. Establishment and characterization of the immortalized porcine lung‐derived mononuclear phagocyte cell line // Front Vet Sci. 2022. V. 9. Article number: 1058124. https://doi.org/10.3389/fvets.2022.1058124Takenouchi T., Masujin K., Suzuki S., Haraguchi S., Hiramatsu K., Kokuho T., Uenishi H. Establishment and characterization of the immortalized porcine lung‐derived mononuclear phagocyte cell line. Front Vet Sci., 2022, vol. 9, article number: 1058124. https://doi.org/10.3389/fvets.2022.1058124Мазлум А., Шарыпова Д.В., Гаврилова В.Л., Пузанкова О.С., Жуков И.Ю., Аронова Е.В., Власова Н.Н., Иголкин А.С. Выделение и титрование вируса Африканской чумы свиней в культуре клеток селезёнки свиньи: метод.рекомендации. Владимир: ФГБУ «ВНИИЗЖ», 2019. 24 с.Mazlum A., Sharypova D.V., Gavrilova V.L., Puzankova O.S., Zhukov I.Yu., Aronova E.V., Vlasova N.N., Igolkin A.S. Vydelenie i titrovanie virusa Afrikanskoi chumy svinei v kul'ture kletok selezenki svin'i: metod. rekomendatsii [Isolation and titration of African swine fever virus in pig spleen cell culture: Methodological recommendations]. Vladimir, FGBI «ARRIAH», 2019, pp. 24. (In Russian)Wilkinson P.J., Lawman M.J., Johnston R.S. African swine fever in Malta, 1978 // Vet Rec. 1980. V. 106. N 5. P. 94–97. https://doi.org/10.1136/vr.106.5.94Wilkinson P.J., Lawman M.J., Johnston R.S. African swine fever in Malta, 1978. Vet Rec. 1980, vol. 106, no. 5, pp. 94–97. https://doi.org/10.1136/vr.106.5.94Roszyk H., Franzke K., Breithaupt A., Deutschmann P., Pikalo J., Carrau T., Blome S., Sehl‐Ewert J. The Role of Male Reproductive Organs in the Transmission of African Swine Fever‐Implications for Transmission // Viruses. 2021. V. 14. N 1. https://doi.org/10.3390/v14010031Roszyk H., Franzke K., Breithaupt A., Deutschmann P., Pikalo J., Carrau T., Blome S., Sehl‐Ewert J. The Role of Male Reproductive Organs in the Transmission of African Swine Fever‐Implications for Transmission. Viruses, 2021, vol. 14, no. 1. https://doi.org/10.3390/v14010031Perrard‐Sapori M.H., Chatelain P.C., Rogemond N., Saez J.M. Modulation of Leydig cell functions by culture with Sertoli cells or with Sertoli cell‐conditioned medium: effect of insulin, somatomedin‐C and FSH // Mol Cell Endocrinol. 1987. V. 50. P. 193–201. https://doi.org/10.1016/0303‐7207(87)90017‐7.Perrard‐Sapori M.H., Chatelain P.C., Rogemond N., Saez J.M. Modulation of Leydig cell functions by culture with Sertoli cells or with Sertoli cell‐conditioned medium: effect of insulin, somatomedin‐C and FSH. Mol Cell Endocrinol., 1987, vol. 50, pp. 193–201. https://doi.org/10.1016/0303‐7207(87)90017‐7Bernier M., Gibb W., Haour F., Collu R., Saez J.M., Ducharme J.R. Studies with purified immature porcine Leydig cells in primary culture // Biol Reprod. 1983. V. 29. N 5. P. 1172–1178. https://doi.org/10.1095/biolreprod29.5.1172Bernier M., Gibb W., Haour F., Collu R., Saez J.M., Ducharme J.R. Studies with purified immature porcine Leydig cells in primary culture. Biol Reprod., 1983, vol. 29, no. 5, pp. 1172–1178. https://doi.org/10.1095/biolreprod29.5.1172Renier G., Gaulin J., Gibb W., Simard P., Leung T.K., Collu R., Ducharme J.R. Isolation, purification and culture of Sertoli cells from immature piglet testes // Acta Endocrinol (Copenh). 1986. V. 111. N 1. P. 411–418. https://doi.org/10.1530/acta.0.1110411Renier G., Gaulin J., Gibb W., Simard P., Leung T.K., Collu R., Ducharme J.R. Isolation, purification and culture of Sertoli cells from immature piglet testes. Acta Endocrinol (Copenh), 1986, vol. 111, no. 1, pp. 411–418. https://doi.org/10.1530/acta.0.1110411Dores C., Rancourt D., Dobrinski I. Stirred suspension bioreactors as a novel method to enrich germ cells from prepubertal pig testis // Andrology. 2015. V. 3. N 3. P. 590–597. https://doi.org/10.1111/andr.12031Dores C., Rancourt D., Dobrinski I. Stirred suspension bioreactors as a novel method to enrich germ cells from prepubertal pig testis. Andrology, 2015, vol. 3, no. 3, pp. 590–597. https://doi.org/10.1111/andr.12031

The authors declare that there are no conflicts of interest present.